Quels sont les principes et applications de la rtPCR

Le principe est le suivant : extraire l'ARN total des tissus ou des cellules, utiliser l'ARNm qu'il contient comme modèle et utiliser Oligo (dT) ou des amorces aléatoires pour inverser la transcriptase en ADNc. Utilisez ensuite l’ADNc comme modèle pour l’amplification PCR afin d’obtenir le gène cible ou de détecter l’expression d’un gène.

Cette technologie est principalement utilisée pour : analyser les produits de transcription génique, obtenir des gènes cibles, synthétiser des sondes d'ADNc et construire des systèmes de transcription d'ARN efficaces.

La RT-PCR (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction) est une technologie qui combine la transcription inverse (RT) d'ARN et l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) d'ADNc.

Premièrement, l'ADNc est synthétisé à partir de l'ARN grâce à l'action de la transcriptase inverse, puis l'ADNc est utilisé comme modèle pour amplifier et synthétiser le fragment cible. La technologie RT-PCR est sensible et polyvalente et peut être utilisée pour détecter les niveaux d’expression des gènes dans les cellules, le contenu des virus à ARN dans les cellules et pour cloner directement des séquences d’ADNc de gènes spécifiques.

L'ARN utilisé comme matrice peut être de l'ARN total, de l'ARNm ou un produit d'ARN transcrit in vitro. Quel que soit le type d’ARN utilisé, la clé est de s’assurer que l’ARN est exempt de contamination par la RNase et l’ADN génomique.

Les amorces utilisées pour la transcription inverse peuvent être sélectionnées parmi les amorces aléatoires, les Oligo dT et les amorces spécifiques d'un gène en fonction des conditions spécifiques de l'expérience. Pour les ARNm de cellules eucaryotes courtes qui n’ont pas de structure en épingle à cheveux, les trois sont disponibles.

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