rtPCR의 원리와 응용은 무엇입니까

원리는 조직이나 세포에서 total RNA를 추출하고, 그 안에 들어있는 mRNA를 주형으로 사용하고, Oligo(dT)나 랜덤 프라이머를 사용하여 역전사효소를 cDNA로 만드는 것입니다. 그런 다음 cDNA를 PCR 증폭을 위한 주형으로 사용하여 표적 유전자를 얻거나 유전자 발현을 검출합니다.

이 기술은 주로 유전자 전사 산물 분석, 표적 유전자 획득, cDNA 프로브 합성, 효율적인 RNA 전사 시스템 구축에 사용됩니다.

RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)은 RNA 역전사(RT)와 cDNA 중합효소 연쇄 증폭(PCR)을 결합한 기술입니다.

먼저 역전사 효소의 작용을 통해 RNA로부터 cDNA를 합성한 후, 이 cDNA를 주형으로 사용하여 표적 단편을 증폭 및 합성합니다. RT-PCR 기술은 민감하고 다재다능하며 세포 내 유전자 발현 수준, 세포 내 RNA 바이러스 함량을 감지하고 특정 유전자의 cDNA 서열을 직접 클로닝하는 데 사용할 수 있습니다.

주형으로 사용되는 RNA는 전체 RNA, mRNA 또는 시험관 내 전사 RNA 제품일 수 있습니다. 사용되는 RNA 유형에 관계없이 핵심은 RNA에 RNase 및 게놈 DNA 오염이 없는지 확인하는 것입니다.

역전사에 사용되는 프라이머는 실험의 구체적인 조건에 따라 랜덤 프라이머, 올리고 dT, 유전자 특이적 프라이머 중에서 선택할 수 있습니다. 머리핀 구조가 없는 짧은 진핵 세포 mRNA의 경우 세 가지 모두 사용할 수 있습니다.

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